細胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細胞能繼續(xù)生長，同時也將細胞數(shù)量擴大，就必須進行傳代,再培養(yǎng)，傳代培養(yǎng)也是一種將細胞保存下去的方法，同時也是利用培養(yǎng)細胞進行各種實驗的必經(jīng)過程，懸浮型細胞直接分瓶就可以而貼壁細胞需經(jīng)消化后才能分瓶。

人外根鞘細胞建立和培養(yǎng)簡介:

創(chuàng)建的4因子轉(zhuǎn)錄法進行細胞制作，原料為末梢血單核細胞，采樣簡單。如使用新鮮單核細胞，2周后可獲得細胞克隆體(圖1)，4周內(nèi)便可以制作出初代細胞(圖2)。在培養(yǎng)方面，使用無滋養(yǎng)層培養(yǎng)法對細胞進行增殖培養(yǎng)，可在每周獲得2-3倍的細胞(圖3，圖4)。在細胞狀態(tài)穩(wěn)定后，進行免疫染色測試，對細胞的未分化狀態(tài)進行確定，分別對細胞進行膜染色(圖5)及核染色(圖6)，由此得到高質(zhì)量的細胞。                        

人外根鞘細胞主要服務(wù):

1)細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)(有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層)

2)細胞增殖及冷凍保存

3)基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實習(xí)

4)新藥及實驗儀器上市前評估

人外根鞘細胞培養(yǎng)的過程中，經(jīng)常見到黑色的顆粒或小黑點，這種情況是怎么引起的呢?該怎么避免呢?

原因:黑點，大概有細胞本身帶的，環(huán)境有的，還有人身上帶進細胞間的,還有就是血清和培養(yǎng)基

1、如果小黑點有增殖趨勢，那么就有可能是污染了，需要處理;

2、如果小黑點沒有增殖趨勢，且不影響細胞生長，也不影響實驗的話，則可能

  a、是“黑膠蟲”，黑膠蟲究竟是一種生物還是非生物，本身就存在爭議。有人認為是從血清中來的一種原蟲，也有人認為是細菌，或是真菌，也有人認為是血清中的蛋白的結(jié)晶。“黑膠蟲”可寄生于動物細胞，也可以生存于培養(yǎng)基中，依靠細胞和培養(yǎng)基中的營養(yǎng)為生，并隨人外根鞘細胞傳代而傳代。“黑膠蟲”與細胞競爭性生長，開始時對細胞并沒有什么影響，但當(dāng)黑膠蟲的數(shù)量多到一定程度的時候， 細胞生長就會受到影響直至死亡，嚴重影響了科研活動的開展和進行。以前(這個至少是10年以前)，很多實驗室在養(yǎng)細胞時用國產(chǎn)血清，那時的血清可能質(zhì)量不過關(guān)，有所謂的“黑膠蟲”，但是也沒有明確的鑒定。但是現(xiàn)在的血清，即使國產(chǎn)的，產(chǎn)品里這種現(xiàn)象就少見了。

 b、是細胞碎片，或血清里德沉淀析出，在做布朗運動。

 c、是核糖體，也可能是雜質(zhì)

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人外根鞘細胞應(yīng)用舉例

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