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大鼠心肌細胞的培養(yǎng)和分離

大鼠心肌細胞的培養(yǎng)和分離
  目的
  建立心肌細胞(大鼠心肌細胞)培養(yǎng)模型,用于心肌細胞體外實驗。
  方法
  采用胰酶消化及新生大鼠心肌細胞與非心肌細胞如成纖維細胞、血細胞等的差時貼壁法分離提純心肌細胞,建立心肌培養(yǎng)模型。
  結果
  心肌細胞(大鼠心肌細胞)培養(yǎng)*長成活時間達3天,心肌細胞受消化時間的影響有不同的形態(tài)表現(xiàn)。
  結論
  可以利用差時貼壁法分離新生鼠心肌細胞并在體外進行培養(yǎng),胰酶消化以低濃度短時間為佳。
  材料
  心肌細胞的消化
  取一只加蓋燒杯,內放一塊用乙醚飽和的紗布,把0~3日齡的大鼠幼鼠放進該燒杯中麻醉,用2%碘酒和75%酒精消毒胸腹皮膚,在無菌條件下開胸取出心臟,立即置于4ºCD-Hanks液(mmol/L:Nacl137,Kcl5.4,Na2HPO40.37,K2HPO40.44,NaHCO34.2)中剪取心室肌,洗凈殘血,剪成約1mm³大小的組織塊,棄去D-Hanks液加入0.08%胰蛋白酶液10~15ml,于37°C靜置5min,吸出上層懸液,并加入等量的含血清培養(yǎng)基。經終止消化后離心(1800r/min)棄上清液,加入含血清的培養(yǎng)液。吹散沉淀細胞,同條件下離心,用10%血清培養(yǎng)液制成細胞懸液,置于37°C含5%CO2培養(yǎng)箱中。
  心肌細胞分離
  根據心肌細胞和非心肌細胞貼壁時間的不同采用2小時差速貼壁,分別獲得心肌成纖維細胞和心肌細胞。心肌細胞按1*106個細胞/ml種于50ml培養(yǎng)液中,培養(yǎng)的前2天在心肌細胞培養(yǎng)液中加入5-溴脫氧嘧啶核苷0.1mmol/l,以抑制非心肌細胞增殖,所有培養(yǎng)的心肌細胞均每2天換液一次。

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