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化學(xué)合成多肽固相合成切割方法
化學(xué)合成多肽固相合成切割方法
固相合成切割方法
固相合成完成之后,必須選擇合適的切割試劑將多肽從樹(shù)脂上切割下來(lái),然后經(jīng)過(guò)冰乙醚沉淀,離心收集沉淀,經(jīng)過(guò)HPLC分離純化,冷凍干燥得到*后產(chǎn)品。由于選擇的樹(shù)脂不同,氨基酸序列不同,(化學(xué)合成多肽)在切割時(shí)候,選擇的切割方法也不完全相同,一般都是選擇酸性條件下切割的條件,對(duì)于PAM,MBHA樹(shù)脂,一般采用HF切割,切割過(guò)程中需要添加對(duì)甲苯酚,對(duì)巰基苯酚,苯甲醚等試劑。而對(duì)于Wang,Rink-Amide,Trt樹(shù)脂,一般采用TFA切割,切割過(guò)程中加入,乙二硫醇,苯甲硫醚,水,三異丙基硅烷,苯酚等。這些添加試劑主要作為碳正離子俘獲試劑使用,(化學(xué)合成多肽)目的是俘獲切割反應(yīng)過(guò)程中生成的碳正離子,減少這些碳正離子對(duì)部分氨基酸側(cè)鏈的進(jìn)攻導(dǎo)致的副反應(yīng),比較容易產(chǎn)生副反應(yīng)的氨基酸有:Trp,Tyr。切割試劑用量一般10-15ml/g樹(shù)脂。常用的切割配比:HF/p-cresol/p-thiocresol(90/5/5),TFA/TIS/EDT/H2O(94/1/2.5/2.5),反應(yīng)一般是在室溫條件下2h-4h。
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